非洲豬瘟PCR試劑盒【產品名稱】
通用名稱：通用型DNA快速提取試劑盒
商品名稱：無
漢語拼音：DNA Kuaisutiqushijihe
非洲豬瘟PCR試劑盒【產品簡介】
本試劑盒基于硅膠吸附柱核酸純化技術，適用樣本為全血、血清和拭子(包括鼻拭子、口腔拭子、環境取樣拭子等)，僅需裂解-過柱-洗滌-洗脫四個步驟即可獲得高濃度、高純度的DNA，無蛋白質污染。本試劑盒提取效率高，質量穩定可靠，操作方便、快捷。
用戶需自備的試劑為無水乙醇或95%以上的醫用酒精。
【產品內容】
產品組成規格使用說明
溶液1-蛋白酶K1 mL
溶液222 mL
溶液310 mL使用前加入15mL無水乙醇
溶液45 mL使用前加入20mL無水乙醇
溶液54 mL
DNA吸附柱50支
收集管2mL50支
離心管 1.5mL50支
【使用前注意事項】
1. 溶液3在使用前需加入15mL無水乙醇并充分混勻。
2. 溶液4在使用前需加入20mL無水乙醇并充分混勻。
3. 需自備若干離心管，本試劑盒提供的50支1.5mL離心管僅用于收集最終提取的DNA溶液。
4. 以下操作如非指明，均在室溫下進行。
5. 本試劑盒贈送1支15mL的量取乙醇專用管，所有使用無水乙醇的步驟均可用95%以上的醫用酒精替代。
6. 離心機于8000 rpm運行時，離心力應大于1400g;使用掌上離心機時，需將離心時間延長至1min。
【操作步驟】
1. 全血、血清樣本：在1.5mL離心管中加入200μL樣本。
拭子樣本： 將1個拭子置于離心管中，加入400μL無菌生理鹽水，充分渦旋后，取200μL溶液置于1.5mL離心管中。
2. 加入20μL蛋白酶K，渦旋或顛倒混合均勻，56℃孵育10min。(無加熱設備的情況下可于室溫靜置孵育15min)
3. 加入400μL溶液2，渦旋或顛倒混合均勻，56℃孵育5min。(無加熱設備的情況下可于室溫靜置孵育5min)
注意：當樣本為全血時，靜置5min后請于12000rpm離心2min，吸取上清至另一離心管。不產生沉淀的血清和拭子樣本可省略離心步驟。
4. 加入200μL無水乙醇，渦旋或顛倒混合均勻。
5. 將DNA吸附柱置于收集管中，將上述溶液全部轉移到DNA吸附柱中，8,000 rpm離心30s，棄濾液。
6. 向DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液3，8,000 rpm離心30s，棄濾液。
注意：初次使用前需向溶液3瓶中加入15mL的無水乙醇，并充分振蕩混勻。
7. 將DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液4，8,000 rpm離心30s，棄濾液。
注意：初次使用前需向溶液4瓶中加入20mL的無水乙醇，并充分振蕩混勻。
8. 將DNA吸附柱重新放回收集管中，8,000 rpm空轉離心30s，棄濾液。將吸附柱打開置于室溫5分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR 等)。
9. 將DNA吸附柱置于新的1.5mL離心管中， 向吸附柱柱膜中央上方小心加入50μL 溶液5(此步驟請謹慎操作，槍頭請勿接觸柱膜)，8,000 rpm離心30s，洗脫液即為DNA溶液。
注意：洗脫體積不應少于30μL，體積過小影響回收效率。DNA溶液請置于-20℃冰箱中保存，避免反復凍融。
【規格】 50次/盒
【貯藏及有效期】室溫(15-25℃)保存，有效期12個月。
【批準文號】
【生產企業】 廣州悅洋生物技術有限公司
僅供獸醫診斷使用
非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒說明書
獸用
【獸藥名稱】
通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒
商品名稱：無
漢語拼音：Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Kuaisu Jiance Shijihe
英文名稱：Real-time PCR for Rapid Detection of African Swine Fever Virus
【主要成分與含量】
序號成分含量
1PCR反應A液1管(0.75mL/管)
2PCR反應B液1管(0.25mL/管))
3陰性對照 1管(0.5mL/管)
4陽性對照 1管(0.5mL/管)
5說明書1份
【作用與用途】本試劑盒適用于豬血液、豬肉組織、淋巴結、脾臟等樣本中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。
【用法與判定】
1 用法
1.1 樣品處理及模板準備
請利用商品化試劑盒提取核酸。
1.2 熒光PCR擴增
1.2.1 試劑準備
實驗前20分鐘將試劑從冰箱取出并恢復至室溫，使其完全融化，充分混勻后瞬時離心去除管壁吸附液體。
1.2.2 配制反應體系
按下表1體系，在配套PCR管中配制反應體系，蓋緊管蓋后瞬時離心10秒，轉移至擴增區。
表1 PCR反應體系
成分體積
PCR反應A液15μL
PCR反應B液5μL
預準備的模板(樣本/對照)5μl
總體積25μl
1.2.3 PCR擴增
開機預熱并檢驗儀器性能后，取配制好體系的PCR反應管，放置在樣品槽相應位置，記錄順序，按下表2設置擴增參數，進行PCR擴增。
表2 儀器PCR擴增參數
階段溫度時間循環數
137℃2 min1
95℃5min1
295℃10 s45
58℃30 s(采集熒光信號)
FAM通道采集熒光信號
2 判定
2.1 合理調整閾值線，不同儀器可根據儀器噪音情況進行調整。
2.2 試劑盒有效性判定
·陰性對照：無Ct值，線形為直線或微斜，無明顯指數增長。
·陽性對照：Ct值≤30，有明顯指數增長，呈典型的S型曲線。
2.3 樣本結果判定
·樣本檢測結果Ct值≤40，有明顯指數增長，判定為陽性，表明樣本中檢測出非洲豬瘟病毒。
·樣本檢測結果40
·樣本檢測結果無Ct值，判定為陰性，表明樣本中未檢測出非洲豬瘟病毒。
【注意事項】
(1)實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴格按步驟執行，不使用本試劑盒提供的組份或不按照說明書進行實驗可能導致錯誤結果。
(2)所有試劑應在規定溫度儲存。-20℃保存的試劑在使用前應充分混勻。試劑盒反復凍融次數不宜超過5次。
(3)實驗操作應按照國家有關臨床基因擴增實驗室管理規范執行，實驗過程應分區(試劑準備區、樣本制備區、核酸擴增區)，各區物品為專用，不得交叉使用，避免污染。
(4)操作臺、移液器、離心機等儀器用品應經常用1%次氯酸鈉、75%乙醇或紫外燈進行消毒。耗材應進行無酶處理。
(5)待檢樣本、試劑盒組份及實驗中的廢棄物需按照具有潛在傳染性物質處理方法進行處理。
(6)為防止熒光干擾，應避免使用含熒光物質的手套，避免用手直接接觸，預防交叉污染。
(7)檢測結果為陰性，并不完全代表為非感染狀態，具體診斷需結合獸醫臨床。
(8)產生假陰性的可能原因為：待檢樣本在采集、運輸、保存及核酸提取過程中操作不當造成DNA降解;樣本中核酸濃度低于最低檢測限;病毒待測靶基因出現變異;未經驗證的其他干擾因素。
(9)產生假陽性的可能原因為：待檢樣本采集、運輸及核酸提取過程中發生交叉污染。
【規格】 50反應/盒
【貯藏及有效期】 試劑盒-20℃以下冷凍避光保存，有效期為12個月。
【批準文號】
【生產企業】 廣州悅洋生物技術有限公司
